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细胞培养你会遇到哪些问题

发布时间:2022-09-08      点击次数:150
  细胞培养的过程控制有点像走钢丝,要在最短的时间内,通过细胞培养的方法获取更高的产量,则必须谨慎且连续地控制工艺过程中的参数;若过程管理出现失误,将导致生产效率下降、运行时间延长;更糟糕的,可能会导致整个批次的细胞培养失败。
  你在细胞培养的过程中,会遇到哪些问题
  1、首先讲一下细胞生长缓慢的原因:
  a)更换了血清或者培养基,细胞需要一段时间适应一下;
  b)由于细胞的特殊种类,培养基中缺少某些生长因子;
  c)培养基中有少量真菌或者细菌污染;
  d)传代的时候细胞密度过低;
  e)细胞状态老化;
  2、解决上述问题的方法:
  a)如果实验室没有某种细胞最适宜的培养基,可以先用原培养条件冻存一些,然后逐渐增加新的培养基比例,25%、50%、75%到100%,传代3-5次后,让细胞慢慢适应。
  b)判断是不是培养基发生污染,可以先不加抗生素,观察细胞状态。
  c)增加细胞的接种密度。
  d)发现细胞老化的时候,及时更换新的细胞。
  e)如果怀疑是支原体污染,一定要隔离疑似污染的培养皿,及时清洁消毒孵箱。
  3、造成细胞死亡的原因:
  a)细胞消化过度;
  b)没有及时换液,营养成分消耗殆尽;
  c)如果前一天细胞的状态很好,换液之后就全死了,应该考虑是否是培养基或者血清的问题。
  4、如何判定细胞是否发生支原体污染:可以选用直接培养法、荧光染色或PCR方法检测,比较常用的是PCR。当细胞发生支原体污染时,原则上是能够去除支原体的,但是整个过程耗时耗力,还要考验个人操作能力。所以如果不是处于细胞存量很少的情况下,建议发现污染时立刻弃掉,重新培养。
  5、如果孵箱中只是某种细胞持续性大量死亡,而其他细胞状态都没问题的话,基本上可以确定就是孵箱存在特异性感染这类细胞的真菌或细菌。
  6、其他注意事项:每个星期都要更换孵箱底盘中的水(紫外照射后超纯水);每两周消毒一次孵箱:75%酒精擦拭一遍后,再用0.1%新洁尔灭擦拭一遍(都用超纯水配制);可以在孵箱底部放一个烧杯,里面放入饱和硫酸铜,可以抑制霉菌生长。不过也有人说硫酸铜会改变孵箱的PH值,如果不是孵箱污染的情况很严重,建议不要使用。
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